译者的话：

入院人员隔离期多长合适？ 4晚，7天，14天？在未来的低价低利润养殖时期，任何成本浪费或冗余都会降低企业的竞争力。隔离期长不仅会增加人工成本，还会增加相应的隔离设施、检测、物流成本。本实验在近四年的观察和监测期间，从多个角度比较了不同生物安全措施/水平和隔离期对PRRS（美国高致病性毒株）和哮喘传播的影响：14-16小时淋浴、换衣服、换鞋+隔离相结合，可以阻止PRRS病毒和哮喘的传播。累计45分钟的淋浴、更衣、换鞋隔离时间也在短期对比实验中显示出有效性。这一实验结果是对过去漫长隔离期的挑战，也是对包括非洲鼠疫在内的其他流行病隔离期设置的反思。我期待在中国有类似的研究信息共享。

同行评审

一晚的隔离可防止猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体通过人员和污染物（靴子和工作服）传播

概括

本文总结了4年（1438天）一晚隔离预防猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体通过人员和污染物在猪之间机械传播的能力观察。结论实在是太令人惊讶了！

关键词：猪、猪繁殖与呼吸综合征、隔离、人员、污染物

长期限制与其他猪有接触的人进入养猪场（隔离）的做法在全球养猪业中是一个备受争议的话题。多年来，养猪场实施了48 小时至96 小时的检疫时间，以降低人员将病原体带入猪场的风险，尽管缺乏数据支持这些检疫时间的科学性。在文献中，Sellers[1] 等人。研究了人们在接触受感染的猪后携带口蹄疫病毒的能力。结果显示，一名人员的鼻拭子在暴露后28小时呈阳性，但在暴露后48小时则不再呈阳性。然而，复制这些结果的尝试并未成功[2]。同样，阿马斯等人。 [3] 报道称，猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) RNA 可以分别在接触感染猪后5 小时和24 小时从洗甲液和鼻拭子中回收。然而，PRRSV 在这些样本中的生存能力尚未得到证实，也没有观察到感染阴性的哨兵猪。最后，Otake [4] 等人。从接触受感染动物的人员的手、靴子和工作服中发现了传染性PRRSV 病毒，并证明其传播给阴性哨兵猪。然而，这项研究还表明，基本的卫生干预措施，如淋浴、换衣服和换鞋，可以在不考虑隔离的情况下预防PRRSV的机械传播[4]。总而言之，这些数据对长期隔离的价值提出了挑战。因此，为了更好地了解这一风险，我们总结了有关隔离一晚预防猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪肺炎支原体（Mhyo）的数据，观察人和污染物（靴子和工作服）的能力从受感染的牛群传播到易感牛群。

材料和方法

这项研究是使用明尼苏达大学动物护理和使用委员会批准的方案进行的。

设施

我们的观察记录与猪病清除中心生产区模型（明尼苏达州圣保罗）的PRRSV 和Mhyo 的4 年（2006-2010）区域传播和生物安全评估相结合[5,6]。在本报告中，我们将重点关注为期4 年的区域传播和生物安全项目中使用的三个设施的活动：猪群本身、现场人员住宿和高水平生物安全猪舍（图1）。

该猪群由300 头体重为25 至120 公斤的猪组成，这些猪在1 至4 年内接种了PRRSV MN-184，并在2 至4 年内接种了Mhyo 菌株232 [5,6]。这是一个不断循环的猪群，因此，在整个四年的研究期间，该设施从未被清空。新到达的猪，大约6 至8 周大，每2 至4 周进入该设施，具体取决于当前研究的实验设计[5,6]。新猪被放置在与现有猪相邻的猪圈中，允许鼻子与鼻子接触，从而使病原体从受感染的动物传播到未受感染的动物。在整个研究过程中，记录了猪呼吸道疾病的临床症状以及猪体内PRRSV 和Mhyo 的传播，发现年死亡率为10% - 12% [5,6]。

现场住宿是猪场净化中心的一栋房屋，作为工作人员的淋浴和出口设施，以及农场专用服装和鞋类的清洗和消毒场所。

最后，这个高水平的生物安全设施饲养了10 头猪，在整个项目期间没有感染PRRSV 和Mhyo。该设施采用全进、全出的原则；因此，第1年每2周（1年26批）、第2-4年每4周（2-4年39批）都有新一批猪进入。该设施的生物安全计划包括一系列经过科学验证的干预措施，针对PRRSV 和Mhyo 的所有直接和间接传播途径，包括旨在防止引入受PRRSV 和Mhyo 污染的生物气溶胶的空气过滤系统[5-7]。

时间段和事件

同样，为了本报告的目的，我们将重点关注在为期四年的区域传播和生物安全项目期间每天发生的三个特定事件周期：污染期、清洁和隔离期以及监测期。污染期大约发生在每天下午2 点至4 点中部标准时间(CST) 之间。这一时期的目的是让研究人员能够接触到感染PRRSV 和Mhyo 的动物。在污染期间，工作人员可以进入该设施的所有11 个猪栏，在那里喂养动物、清洁猪栏地板、治疗病猪、清除死猪并完成必要的维修。在典型的工作日，一到两个人进入每个设施。每个月，工作人员还会对育肥猪进行标记和销售，并对猪群进行采样，以检测PRRSV 和Mhyo 状况。每天的污染期结束后，工作人员离开设施，清洁和隔离期开始。

清洁和隔离期在污染期结束后立即开始，并从下午4 点左右开始。至次日中部标准时间(CST) 上午6 点。该时期的目的是抵消污染期的影响。期间，工作人员从养猪场前往住处，脱下农服、鞋子，洗澡，换上自己的衣服、鞋子，从下午4点左右开始远离猪场。当天到第二天早上6点左右。与猪接触。衣服和鞋类用7% 戊二醛和26% 季铵盐（Syn醛；Conservation International，亚特兰大，佐治亚州）消毒。次日中部标准时间5:30时左右，工作人员再次沐浴，换上干净的农场专用服装和鞋子，进入高生物安全级别设施，开始监测阶段。

监测期，即与报告相关的第三个也是最后一个事项期，将于中部标准时间(CST) 每天上午6 点至8 点在高度生物安全设施进行。此阶段的目的是衡量清洁和隔离期间所用做法的有效性。具体来说，测量了两个结果：对人员进行PRRSV 和Mhyo 检测，并对设施中饲养的哨兵猪进行PRRSV-Mhyo 状态检测。清洁隔离期结束后，工作人员立即从住所转移到约100米外的高级生物安全设施内。进入设施的专用接待室后，立即采集拭子以确定人员、衣服和鞋类上是否存在PRRSV RNA 或Mhyo DNA。为了收集样本，将涤纶拭子（Fisher Scientific，汉诺威公园，伊利诺伊州）浸泡在含有3% 胎牛血清的微量营养素培养基（MEM）（Difco，底特律，密歇根州）中，并以之字形放置在每个人的脸上。轻轻擦拭头部、面部、颈部、躯干、手、手臂和腿。然后将拭子储存在-20C 的MEM 中，直至采集后24 - 48 小时进行实验室分析，以保持病毒完整性并最大限度地提高检测灵敏度。采样后，穿戴设施专用靴子、工作服和手套，并用7% 戊二醛和26% 季铵盐对靴子进行消毒。随后，工作人员进入猪群，给猪喂食并清洁猪圈。此外，这10头猪每周接受一次健康诊断评估，包括对所有10头猪的呼吸道疾病临床症状进行目视观察、血液检测和鼻拭子检查。收集后，来自人员、污染物和动物的所有样本均在明尼苏达大学兽医诊断实验室（明尼苏达州圣保罗VDL）通过聚合酶链反应(PCR) 进行PRRSV RNA 和Mhyo DNA 检测[8,9]

对照组Controls

除了每天对动物、人和无生命物体进行采样外，还进行了两组对照实验，即PRRSV传播控制和PRRSV隔离期控制。这些对照不包括Mhyo，因为它们是在研究的第一年进行的，当时PRRSV 是牛群中之前接种疫苗的唯一病原体。

传播控制的目的是记录PRRSV 是否通过人员和污染物与受感染动物接触而传播给哨兵猪（图2）。连续5 天，1 人接触牛群内受感染的动物，然后立即在高级生物安全设施中接触阴性哨兵猪，且没有采取任何基本清洁措施（淋浴、洗手、换工作）衣服和靴子）（10头6至8周龄的猪）。

控制期的目的是记录是否可以通过基本清洁措施来防止人员和污染物传播PRRSV（图3）。连续五天，一名人员接触了猪群中感染的猪，然后立即前往高级生物安全设施与哨兵猪互动，那里有10头6至8周龄的阴性哨兵猪。在进入高级设施之前，该人在处理不同组的猪之间淋浴并更换工作服和靴子，但没有遵守指定的隔离时间。对照组分开安置，以防止直接和间接接触。

如上所述进行日常动物护理，允许每组动物和工作人员之间进行广泛的身体接触。此外，如前所述，每天在指定地点收集工作人员拭子和污染物拭子（图2和图3）。此外，两个对照组的哨点猪在第0 天（到达哨点设施时）、第5 天（5 天暴露期结束时）和第20 天（暴露结束后15 天后）进行了血液检测时期）。在MN VDL 通过PCR 检测血液样本中是否存在PRRSV RNA。

图1：设施及人员日常流动示意图。

研究人员每天在现场住所淋浴并穿上干净的衣服和鞋子，然后进入高级生物安全设施（经过空气过滤），在进入有猪的区域之前穿上干净的衣服和靴子并洗手，这里饲养的猪是呼吸综合征病毒(PRRSV) 和肺炎支原体(Mhyo) 双阴性猪。在接触动物之前，从手、工作服和靴子上收集拭子，并使用聚合酶链式反应测试PRRSV RNA 和Mhyo DNA。完成动物护理任务后，工作人员进入养猪场，那里有300头猪感染了PRRSV和Mhyo。完成动物护理后，工作人员重新进入住所，在那里洗澡，换上干净的衣服，并保持一晚没有动物。第二天早上，重复这个过程。这种人员流动模式重复了1438天。

图2：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）传播控制实验人员流程汇总图。

本实验的目的是证明在缺乏特定生物安全控制的情况下，PRRSV 可以通过人员和污染物从感染猪群传播到阴性猪群。连续5天进行对照实验，每天从进入高级生物安全设施的手、工作服和靴子上采集拭子，通过聚合酶链式反应检测PRRSV RNA。

图3：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）隔离期间对照实验人员流程汇总图。

本实验的目的是记录是否可以实施基本的卫生措施来防止PRRSV 通过人和污染物传播。控制方案连续进行5 天，包括人员在淋浴和更换衣服和鞋子后直接从PRRS 阳性牛群前往高级生物安全设施。进入后一个设施后，收集了手、工作服和靴子上的拭子，并通过聚合酶链反应检测PRRSV RNA。

结果

在1438天的研究期间，共有25名人员参加了上述设施之间的活动。分别采集7174份人员样本和4833份污染物样本（PRRSV RNA和Mhyo DNA检测）进行检测。在为期4 年的研究期间，所有拭子均为PCR 阴性，饲养在高级生物安全设施中的所有动物（480 只动物）均为PRRSV 阴性和Mhyo 阴性。清洁和隔离时间每天大约持续14 至16 小时。

在扩散控制实验中，观察到由于接触受污染的人员和污染物而导致PRRSV 的二次机械传播。在暴露第5天，10头哨兵猪中有5头呈PRRSv阳性，在暴露第20天，10头哨兵猪中有10头呈PRRSv阳性。此外，在与猪群中受感染动物接触后进入高度生物安全设施时收集的人员和污染物样本中收集的45 份拭子中，有40 份检测到PRRSV RNA。

相比之下，在隔离控制期间，PRRSV 向哨兵猪的传播得到了预防，因为所有哨兵猪在测试期间仍保持PRRSV 阴性。在离开牛群之前的5 天暴露期间，45 份人员和污染物拭子中的42 份检测到了PRRSV RNA。淋浴和更换靴子后进入哨点猪设施时采集的所有拭子（45/45）均为PCR 阴性。不同群猪之间，人员洗澡、更换工作服、靴子大约需要45分钟。

讨论

在本报告中使用的条件下，隔离1 晚（持续14 至16 小时）可防止PRRSV 和Mhyo 通过人员和污染物在受感染牛群和易感牛群之间传播。虽然这些信息本质上是观察性的，并且是在模型条件下收集的，但它对其在长期隔离期间的有效性提出了挑战。

此外，虽然之前报道过的研究数据描述了污染物和人员机械传播PRRSV 的能力[4,5]，以及降低这些风险的干预策略，但这项新研究是新颖且严格的，因为这些观察结果是在很长一段时间，涉及大量人员，使用广泛的基于抗原的采样程序，包括一组基于PRRSV 的对照实验。

不幸的是，由于研究设计的限制，无法包括大量对照以及一组Mhyo 对照。此外，这项研究不需要收集个人的鼻拭子。这一决定基于之前的一项研究[3]，其中从人类鼻腔样本中回收的PRRSV RNA 仅限于暴露后48 小时收集的单个样本。这是作者的观点，如果这确实是一个真实的结果，那么我们预计检测的频率会更大，最初的检测时间应该发生在暴露后更早，病毒也会在更多的研究人员中被检测到。最后，由于我们的研究持续时间长且该程序具有侵入性，因此不可能在如此多的参与者中实施该研究。

总之，尽管这些观察结果很有趣，并且有可能提高养猪业人员隔离政策的有效性，但显然需要更多的研究来调查和澄清这个问题。例如，由于这些观察结果仅适用于PRRSV 和Mhyo，我们不知道它们是否适用于其他病原体，例如猪圆环病毒2 型或猪流感病毒。最终，我们还没有确定防止病原体传播所需的最短隔离时间。根据这些关于PRRSV 和Mhyo 的观察结果，任何长度的隔离都可以被视为“浪费时间”。然而，由于我们的对照使用不包括Mhyo，因此在没有更多数据的情况下我们仍然无法得出任何确定的结论。

理想情况下，如果未来的研究能够回答这些问题，并且整个行业的决策者可以进行有组织的讨论，那么行业领导者之间也许可以达成协议，制定一项国际检疫计划。在那之前，我们希望本报告中的观察结果能够引发早期采用者之间的讨论，指导决策，并促进那些已经被数据说服的人拥有和运营的系统之间的变革。