根据临床症状和病理变化，再结合流行病学特点不难作出初步诊断。确诊需进行实验室检查。

　　（一）细菌学检查：取发病或病死动物的脓汁、关节液、鼻咽内容物、乳汁（乳房炎）、肝、脾、肾组织或心血等，任选2-3种，制成涂片或触片，干燥、固定、染色、镜检。应有革兰染色阳性，球形或椭圆形，并呈短链状排列的链球菌。

　　（二）培养检查：选取上述病料，接种于含血液琼脂培养基，置37℃培养24h，应长出灰白色、透明、湿润黏稠、露珠状菌落。菌落周围出现α型或β型溶血环（猪、羊、兔链球菌为β型，牛、鱼为α型）。

　　（三）动物接种：选取上述病料，接种于马丁肉汤培养基，经24h培养，取培养物注射实验动物或本动物，小鼠皮下注射0.1- 0.2mL或家兔皮下或腹腔注射0.1-1mL，应于2-3d内死于败血症，并应从实质脏器中分离出链球菌。但牛乳房炎以2mL经腹腔注射小鼠，观察半个月不死：羊病料培养物也可以1mL经皮下或静脉注射绵羊，于24-48h内死亡，并可从心血和脏器组织中分离出有荚膜的链球菌。鸡病料培养物以0.3-0.5mL，经皮下注射雏鸡应于第2天死亡。

　　应用PCR：由国家卫生部与农业部疾病控制中心共同研制的PCR方法两小时可出结果。现在有多种分子生物学方法可用于猪链球菌感染的诊断、猪链球菌的分型和致病因子的鉴定。聚合酶链式反应(PCR)可直接鉴定扁桃体组织或拭子中的菌株，区分致病和非致病菌株。这样，可鉴定致病菌株的携带者。随机扩增多形态DNA反应(RAPD)可用于菌株分类。核酸分型和溶血活性测定可用于一些致病因子的鉴定。