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鸡胚疫苗接种技术有着广泛的用途。除分离培养病毒、支原体、衣原体等病原体以诊断传染病外，还可用于病毒鉴定、滴度测定、致病性测定以及疫苗和抗原的制造。因此，掌握鸡胚疫苗接种技术对于传染病的研究和预防非常重要。 1.选择胚胎 根据需要选择合适日龄的鸡胚胎。大多数病毒适用于9至12天大的鸡胚。鸡胚胎应有白色蛋壳，以便于观察。鸡胚胎应发育正常、健康活泼，不宜是过大、过小、畸形的胚胎。鸡胚胎应来自健康无病的鸡，不应含有能抑制所接种病毒的母源抗体。最好使用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。 2.根据鸡蛋的位置 接种前，应在鸡蛋照明器下检查鸡胚胎，以挑出死亡和虚弱的胚胎。对于所有健康胚胎，先用红铅笔画出气室的位置，然后在胚胎侧面画出接种部位（进针点）。接种点应避开大血管，靠近气室边缘，距胚头1cm左右。 鸡胚接种技术 3.疫苗接种 鸡蛋放置到位后，即可开始疫苗接种。先用碘酊对接种部位和气室进行消毒，然后用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针将孢子注入蛋壳内。尿囊腔接种：最常用的接种方法，此法可用于新城疫、丢蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等。蛋壳消毒后，先在气室上打一个小孔，然后在胚胎靠近气室的一侧打一个小孔。使用5号至7号针头的注射器插入孔中约1.5cm。接种0.1至0.2mL的接种材料。进针时，针与蛋壳的角度应保持在30C。针不应垂直插入。注射完成后，立即用融化的热石蜡密封注射口和气室内的小孔，然后放回37培养箱中72至120小时。 绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒、马立克氏病毒的分离培养。蛋壳消毒后，先在气室上打一个小孔，然后用烙铁或钢锯条在靠近气室胚胎一侧的蛋壳上开一个4毫米方的小孔，避免出现大血容器，然后用刀尖小心地撬开。打开蛋壳时，不要损伤蛋壳膜，形成蛋窗。用针尖轻轻刺破蛋窗中央的蛋壳膜，但不要损伤蛋壳膜下的绒毛尿囊膜。将1滴灭菌生理盐水或甘油滴在针尖穿刺处，然后用吸尖在气室小孔上吸气，使胚胎内产生负压。此时，卵窗处的绒毛尿囊膜会下沉，形成人工气室。此时可以看到生理盐水或甘油快速渗透。用注射器将23滴接种物滴入蛋窗的绒毛尿囊膜上，并用透明胶带将蛋窗密封。将气室小孔用石蜡密封，将接种后的鸡胚平放在培养箱内，蛋窗朝上，不要运输。 卵黄囊接种：适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣原体、立克次体的分离培养。接种方法：将气室末端的蛋壳消毒后，在气室中央打一个小孔，用7号针注射器垂直刺人约3cm，注入接种物约0.10.2mL。用石蜡密封，37继续孵育，每天翻蛋两次。 4.孵化和观察 接种后继续37孵化，每天光照两次，并随时清除死胚。一般来说，24小时内死亡的胚胎大多是由于外伤或细菌污染造成的，因此应该丢弃。24小时后死亡的胚胎被取出并置于4C冰箱中并标记。接种疫苗后的潜伏时间长短因病毒类型而异。一般来说，新城疫病毒、支气管炎病毒、滴蛋综合征病毒和法氏囊病毒需要孵育48至120小时，而喉气管炎病毒和马立克氏病病毒需要孵育48至120小时。96h，痘病毒需要孵化4到5天，脑脊髓炎病毒需要孵化直到雏鸡孵化。 5.收集毒药 接种后的鸡胚孵化到规定时间后，应从培养箱中取出，在4下冷冻36小时左右，或在10以下快速冷冻4小时左右。但鸡胚胎一定不能冷冻，否则容易发生溶血。冷冻后，按照以下步骤收集毒物。将鸡胚放在蛋盘或蛋架上，气室朝上。用碘酊和酒精消毒后，用无菌镊子撬开气室的蛋壳或揭掉人造蛋窗的透明胶带，露出蛋膜。小心不要让蛋壳碎片落入鸡胚内。尿囊液：气室打开后，用无菌眼科镊子慢慢撕下蛋壳膜，然后夹住绒毛尿囊膜轻轻提起，用巴斯德吸管刺破绒毛尿囊膜，直接吸取尿囊液。为防止羊膜堵塞吸痰管口，吸痰前可用镊子轻轻压下羊膜和胎膜。每个鸡胚胎一般可接收8毫升左右的尿囊液。羊水：吸收尿囊液后，可用镊子夹住羊膜，将巴斯德吸管直接插入羊膜腔吸出羊水，然后用镊子提起羊膜或按压胎儿，直至胎儿产下。收集羊水。相当一部分病毒羊水和尿囊液可以混合。有的可以混合，所以两者应分别收集和释放。绒毛尿囊膜：如果想收获整个尿囊膜，可将消毒后的全部蛋液倒出，打开蛋壳，撕下壳膜。此时，绒毛尿囊膜附着在蛋壳内壁上，可用镊子将其剥离。胚胎：消毒并打开气室蛋壳后，用镊子撕开蛋壳膜和绒毛尿囊膜，拿起胚胎，用剪刀剪断蛋黄带，将胎儿放入消毒容器中。 |
